缢蛏丝氨酸蛋白酶基因的序列特征及其表达分析

含有clip结构域的丝氨酸蛋白酶是一类新的丝氨酸蛋白酶家族,可能参与非特异性免疫防御功能。从缢蛏(Sinonovacula constricta)cDNA文库中筛选出一条丝氨酸蛋白酶同源EST序列,然后通过5’RACE扩增、测序,拼接得到全长为1 228 bp的cDNA序列,包括66 bp的5’非翻译区和160 bp的3’非翻译区,以及1 002 bp的开放阅读框。阅读框共编码333个氨基酸,含有17个氨基酸的信号肽序列,并含有发卡结构域(clip domain)和胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶结构域(Tryp_SPc domain)。在clip结构域中包含6个半胱氨酸残基形成的3个二硫键,在Tryp_SPc结构域中包含His-Asp-Ser催化三联体(HDS)。该缢蛏丝氨酸蛋白酶基因被命名为ScSP。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析表明,ScSP在缢蛏的外套膜、水管、鳃、斧足、性腺、肝胰腺6个组织中均有表达,尤其在肝胰腺中表达显著高于其他组织,其次为性腺组织,而水管,外套膜和鳃中表达量最低。缢蛏经鳗弧菌(Vibrio anguillarum)诱导感染后4 h和8 h,肝胰腺中的ScSP基因表达量显著上调。缢蛏丝氨酸蛋白酶的序列特征与表达分析揭示了ScSP是含有clip结构域的丝氨酸蛋白酶基因,参与了非特异性免疫防御,为进一步研究该基因的结构和功能奠定了基础。     

贝类净化中试生产工艺技术

本文介绍用紫外线法消毒的海水对文蛤、花蛤、缢蛏进行净化的中试生产工艺技术及其净化效果。通过对该三种净化贝净化前后的各种安全指标以及其净化过程中大肠菌群数和砂份含量随时间的变化进行检测,认为原料符合SC/T 3013-2002规范的文蛤、缢蛏、花蛤经24小时的净化其大肠菌群都能达到DB35/575-2004净化海水贝类标准的要求(≤300MPN/100g贝肉),同时大肠群菌数较低的贝类可以缩短净化时间;根据其含砂量的不同净化时间可控制在8~16小时;要通过净化来大量降低贝类的重金属、农药及贝毒的含量似乎是不可能的;根据贝类品种的不同,其净化过程的死亡率在1.1~3.5%,产品得率90~98%;其净化产品在8℃~10℃贮存与流通可贮藏7天。     

缢蛏稚贝饵料和底质的研究

给缢蛏稚贝投以三角褐指藻加钙质角毛藻和叉鞭金藻加钙质角毛藻的饵料效果最佳，稚贝不但生长快(日平均增长壳长82微米)，而且存活率也高(90％)。饵料投放密度为：在培养第1-4天，2．5万个-5万个／毫升；第5-8天，每天增加至10万个／毫升左右；第9天后，可增至20万个／毫升。在稚贝培育初期宜在水底投放细砂或泥质砂，随着稚贝的生长发育，逐渐增加底质中泥土的比例，这样可提高育苗成活率。     

温度与盐度和缢蛏幼体生存、生长及发育的关系

本文以长期生活在较高盐度(26—28‰)海域的亲蛏所繁衍的幼体为材料,探索温度和盐度单因子及双因子结合与幼体生存生长、发育的相互关系。浮游幼虫期适盐范围为8.4—32.4‰,最适盐度为12.4‰,稚贝适盐范围为8.4—28.4‰,最佳盐度为12.4‰。温度对幼体的影响,是受盐度高低所支配。在盐度为28.4‰生境中培育,浮游幼虫期适温范围为17—25℃,最适温度为21℃,稚贝适温范围为13—25℃,最适温度为17℃,幼体对25℃以上的较高温度的忍耐力较差。若在最适盐度(12.4‰)中培育,浮游幼虫期最适水温为25℃,稚贝最适水温为21℃。幼虫对较高盐度的忍耐力比对较低盐度的忍耐力来得强。     

缢蛏与对虾无公害生态养殖技术研究

改造66．7hm^2对虾养殖池塘，放养规格6000粒／kg的缢蛏苗种6250kg，日本对虾苗种1200万尾（2茬），当年共收获缢蛏（规格6．67cm）270100kg，对吓124400kg，实现产值537．39万元，利税369．67万元。     

中国对虾与缢蛏投饵混养的实验研究

在４ 个５０ ｍ × ５０ ｍ ×１８ ｍ 的陆基围隔中分别放入缢蛏 （ Ｓｉｎｏｎｏｖａｃｕｌａ ｃｏｎｓｔｒｉｃｔａ） ０ ,２５０ , ３７５ 和５００ 只（ ０ , １０ ,１５ 和２０ 只／ ｍ ２） , 壳长为 ５４０ ｃｍ ±０３５ ｃ ｍ , 再放入等量 （６ 尾／ ｍ ２） 的中国对虾 （ Ｐｅｎａｅｕｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ） , 体长为２８５ ｃｍ ±０１６ ｃ ｍ 。投饵饲养３ 个月结果表明, 缢蛏放养密度为２０ 只／ ｍ ２ 时, 对虾的成活率 （７４０ ％ ） 和产量 （４１３６ ｋｇ／ｈ ｍ ２） 最高, 分别比单养对虾的成活率（６５０ ％ ） 和产量 （３０５４ ｋｇ／ｈ ｍ ２） 高１３８ ％ 和３５４ ％ , 氮的绝对利用率提高了５３ ％ 。缢蛏密度为１０ 只／ ｍ ２ 时, 其成活率和产量最高, 为９０４ ％ 和３１６ ｋｇ／ｈ ｍ ２ ; 密度为２０ 只／ ｍ ２ 时, 降至 ７８２ ％ 和９２ ｋｇ／ｈ ｍ ２。本系统中对虾的生产潜力为１２４ ｇ／ （ ｍ ２·ｄ） , 缢蛏的极限配养量为１５００ ｋｇ／ｈ ｍ ２ 左右。     

缢蛏多糖的提取及抗氧化作用研究

以新鲜缢蛏的碎肉为材料,加水配制成一定比例的匀浆,利用超声波提取法对缢蛏碎肉匀浆进行多糖的提取。利用蒽酮—硫酸法对多糖得率进行计算。将得到的多糖粗品通过DEAE离子交换层析及G-75凝胶层析进一步分离纯化。通过邻苯三酚自氧化体系和Fenton体系测定所得样品的抗氧化能力。结果表明:利用超声波提取多糖的提取率为19.93%。多糖粗品通过DEAE离子交换柱,得到2个峰,峰1对超氧阴离子的清除能率为43.89%,质量浓度为1 mg/ml时,对.OH清除率为57.80%。峰2对超氧阴离子的清除能率为57.80%,质量浓度为1 mg/ml时,对.OH清除率为77.83%。将DEAE峰2进行G-75凝胶层析得到2个峰,峰1对超氧阴离子的清除能率为83.08%,质量浓度为1 mg/ml时,对.OH清除率为94.76%。峰2对超氧阴离子的清除能率为74.41%,质量浓度为1 mg/ml时,对.OH清除率为52.41%。     

缢蛏家系生长与消化酶活性的比较

两次对6个缢蛏家系(A1、B1、C1、D1、E1和F1)生长性状(壳长、壳高、壳宽、总重和软体部重)进行测量、分析,并测定其体内淀粉酶活性和纤维素酶活性。发现缢蛏胃、消化盲囊等器官内淀粉酶活性较高,而纤维素酶的活性很低,消化酶活性与其滤食微藻的食性有关系。对比缢蛏生长性状的增长和消化酶活性的提升,结果表明家系D1的5个生长性状均取得最大值,且与家系A1、B1、C1、E1及F1存在显著差异(P0.05)。家系F1的5个生长性状均取得最小值,且各性状显著小于家系D1。随着日龄的增长,各个家系缢蛏个体的淀粉酶活性和纤维素酶活性都有所增长,2次的测量值显示同样的趋势,D1C1E1A1B1F1。发现缢蛏消化酶活性与生长发育相关,较快的生长速度对应较强的消化生理机能,高水平的消化酶活性有利于缢蛏对营养物质的消化吸收并转化为生长发育所需的能量。     

缢蛏体形性状对活体重和肉重的影响效果分析

随机选取丹东东港市黄土坎镇沿海滩涂的缢蛏150只,测定其壳长(X1)、壳高(X2)、壳宽(X3)、活体重(Y)和肉重(Z),共5项性状。运用相关分析、通径分析,计算了以体形性状为自变量,重量性状为因变量的相关系数、通径系数、决定系数及相关指数,定量分析缢蛏体形性状对重量性状的影响效果。结果表明,3个体形性状对活体重和肉重(熟)的相关系数均达到极显著水平(P<0.01);3个性状对活体重的通径系数达到极显著水平(P<0.01);壳高和壳宽对肉重(熟)通径系数达到极显著水平(P<0.01),说明壳长、壳高和壳宽是影响活体重的主要因素;壳高和壳宽是影响肉重(熟)的主要因素。利用多元回归分析,剔除不显著性状,分别建立了体形性状对重量性状的回归方程:Y=-18.763+0.151 X1+0.698 X2+0.432 X3;Z=-7.997+0.293 X2+0.251 X3。以上体形性状对重量性状影响效果的分析结果为缢蛏遗传与育种提供了基础参考。     

缢蛏IGFALS基因的表达特征及IGF系统对生长的调控作用

类胰岛素生长因子(insulin-like growth factor,IGF)信号通路在机体的发育、繁殖以及生长等过程中起着重要的调控作用。类胰岛素生长因子酸不稳定亚基(IGF acid-labile subunit,IGFALS)是IGF系统中的重要一员,可通过延长IGF的半衰期参与IGF信号通路的调控。本研究首次在缢蛏转录组数据库中筛选鉴定了两个IGFALS基因,包含完整的开放阅读框,分别命名为IGFALSa和IGFALSb。IGFALSa基因的cDNA序列为4809 bp,编码996个氨基酸;IGFALSb基因的cDNA序列为1925 bp,编码546个氨基酸。在缢蛏不同发育期的表达分析中发现,IGFALSa和IGFALSb在幼虫的前期发育阶段均只有少量表达,而随着幼虫的发育,其表达量逐渐上升;组织表达分析表明,IGFALSa在外套膜和性腺中高表达,IGFALSb则在水管中高表达。利用不同质量浓度胰岛素短期刺激缢蛏稚贝,当质量浓度为10 mg/L时,两个IGFALS基因表达量均显著上调,其下游基因IRS、PDK1、MPKP1的表达量也显著上调;进一步利用10 mg/L胰岛素长期喂养缢蛏稚贝,结果显示其壳长和壳宽的日生长率均显著提升。